敲除界的yyds——維真小鼠gRNA pool克隆庫(kù)！
無標(biāo)題文檔
CRISPR/Cas9是一種新型的基因組編輯技術(shù)，具有簡(jiǎn)單、成本低和高效的特點(diǎn)，被廣泛應(yīng)用于多個(gè)物種的精確基因組編輯。在基因敲除實(shí)驗(yàn)中，由于gRNA所介導(dǎo)的敲除效率難以預(yù)估，因此，為了提高切割效率，通常會(huì)靶向同一基因設(shè)計(jì)并合成多條gRNA。
維真生物現(xiàn)已建立了針對(duì)小鼠13000余個(gè)基因的gRNA Pool克隆現(xiàn)貨庫(kù)，分別針對(duì)每個(gè)基因設(shè)計(jì)了5條gRNAs，pool在一起克隆至AAV載體中，大大增加目的基因的敲除效果。
小鼠gRNA pool克隆載體圖
產(chǎn)品特色
①U6驅(qū)動(dòng)gRNA，CAGmini驅(qū)動(dòng)GFP，便于監(jiān)測(cè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效率；
②載體骨架為AAV，可直接進(jìn)行AAV包裝；
③非常適合與spCas9 AAV病毒或spCas9轉(zhuǎn)基因動(dòng)物聯(lián)合應(yīng)用；
④可出售整庫(kù)，也可出售單一子庫(kù)：分轉(zhuǎn)錄因子、蛋白激酶、磷酸酶、藥物靶點(diǎn)、膜蛋白等。
效果展示
針對(duì)小鼠Pten基因，我們?cè)O(shè)計(jì)了5條gRNAs，分別構(gòu)建了5個(gè)單gRNA的質(zhì)粒和gRNAs mix質(zhì)粒。將5個(gè)單gRNA的質(zhì)粒和gRNAs mix質(zhì)粒分別搭配spCas9質(zhì)粒轉(zhuǎn)染N2A細(xì)胞。轉(zhuǎn)染后24h，用puromycin進(jìn)行篩選。轉(zhuǎn)染后72h，提取細(xì)胞總RNA，然后通過RT-PCR檢測(cè)小鼠Pten基因的敲除效果。結(jié)果顯示，gRNAs mix組相比單條gRNA組目的基因mRNA降低更顯著（圖1），通過克隆加測(cè)序分析了編輯位置處的插入、缺失和突變（圖2）。
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圖1：gRNAs mix組較其他組的靶基因mRNA降低更低
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圖2：編輯位置處插入、缺失和突變的測(cè)序結(jié)果
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