AAV血清型開(kāi)發(fā)，助力基因治療！
小V前期已經(jīng)為大家介紹了維真生物特有的AAV血清型快速篩選試劑盒，本期將向大家介紹如何篩選新的AAV血清型。
腺相關(guān)病毒（AAV）的多種特點(diǎn)如：組織特異性、良好的擴(kuò)散性、低免疫原性、高安全性和穩(wěn)定性，使其成為基因治療的首選載體。AAV的血清型是由AAV的衣殼蛋白決定的，天然的AAV衣殼有成百上千種，不同的衣殼蛋白（AAV血清型）提供了多樣性的組織侵染能力，這為避開(kāi)基因治療宿主已有的對(duì)某些衣殼蛋白的免疫抗性提供了可能，但這也為利用AAV進(jìn)行基因治療的項(xiàng)目開(kāi)發(fā)造成一些困難。較早用于基因治療的AAV（如2型和5型）可以侵染多種組織和細(xì)胞，且已沒(méi)有專(zhuān)利保護(hù)，但仍有多達(dá)50-60%人群具有這些AAV的抗體或細(xì)胞免疫，從而限制了這些AAV用于基因治療。新發(fā)現(xiàn)的非人靈長(zhǎng)類(lèi)的AAV（如8型和9型），雖然感染人群很少，但都處于專(zhuān)利保護(hù)期。
不同的AAV血清型具有一定的組織感染特異性，然而這種組織特異性比較低，通常AAV可以廣泛地感染多種組織和細(xì)胞，這為如何避免過(guò)多感染非目標(biāo)組織，利用AAV進(jìn)行基因治療造成很多困難。
維真生物很早便開(kāi)展了AAV血清型篩選和包裝服務(wù)，積攢了豐富的經(jīng)驗(yàn)。
如何在基因治療項(xiàng)目研發(fā)中選取恰當(dāng)?shù)腁AV血清型,我們提供了以下方案:
1. 通過(guò)搜索文獻(xiàn)和正在進(jìn)行的臨床試驗(yàn)來(lái)確定可選用的AAV血清型，http://www.genetherapynet.com/clinicaltrialsgov.html 匯集了正在進(jìn)行的基因治療臨床試驗(yàn)，通常都可以找到選用的AAV血清型的資料。
2. 利用維真生物特有的AAV血清型篩選試劑盒，檢測(cè)與驗(yàn)證AAV血清型對(duì)靶組織的侵染特異性。
圖1 AAV血清型篩選試劑盒檢測(cè)多種AAV血清型對(duì)小鼠腦神經(jīng)細(xì)胞的感染情況帶有GFP報(bào)告基因的11種已知AAV血清型混合后，尾靜脈注射小鼠，四周后取小鼠腦組織，切片觀察。利用Q-PCR分析不同血清型對(duì)神經(jīng)元的侵染能力。 A. 小鼠大腦切片。綠色信號(hào)為GFP報(bào)告基因的表達(dá)。 B. 切片的局部放大。 C. Q-PCR顯示各個(gè)血清型的侵染能力。AAV-php.B的侵染能力最強(qiáng)。3. 對(duì)已有的AAV血清型進(jìn)行理性的設(shè)計(jì)突變：如去除AAV衣殼蛋白中潛在的泛素化位點(diǎn)以提高AAV的感染能力；或去除AAV衣殼蛋白中潛在的介導(dǎo)對(duì)肝細(xì)胞感染的序列，以防止對(duì)非靶點(diǎn)組織特別對(duì)肝組織的感染。
4. 利用維真生物的基因混編（gene shuffling）AAV 血清型文庫(kù)及AAV衣殼蛋白表面展示文庫(kù)進(jìn)行特定方法注射、特定組織的定向演化（directed evolution screen），篩選新的AAV血清型。
圖2 定向演化篩選到的對(duì)小鼠大腦GFAP陽(yáng)性細(xì)胞具有特異性侵染能力的AAV血清型
利用維真生物的基因混編AAV 血清型文庫(kù)，經(jīng)多輪體外與體內(nèi)篩選，得到一種新的AAV血清型。經(jīng)小鼠大腦定點(diǎn)注射，三周后取腦組織，切片染色觀察。 A. AAV攜帶的Cre基因激活小鼠體內(nèi)DIO RFP 的表達(dá)。 B. RFP 與小膠質(zhì)細(xì)胞Marker Iba1共標(biāo)記。 C. RFP 與星形膠質(zhì)細(xì)胞Marker GFAP共標(biāo)記?？梢?jiàn)RFP與GFAP可以共標(biāo)記，但并不與Iba1共標(biāo)記，反映了新的AAV血清型對(duì)GFAP陽(yáng)性的星形膠質(zhì)細(xì)胞的特異性侵染。
5. 維真生物收集了大約200種自然存在AAV血清型衣殼蛋白基因的克隆。目前業(yè)界對(duì)這些AAV血清型的組織和細(xì)胞感染能力尚沒(méi)有深入研究，有很大可能存在比目前已知血清型包裝效率更高，對(duì)組織特異性更高的新的血清型。
維真生物愿意與科研人員共同分享，共同開(kāi)發(fā)新的血清型及其應(yīng)用。
歡迎致電400-077-2566！
