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質(zhì)粒轉(zhuǎn)染試劑
一、產(chǎn)品簡介:
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二、產(chǎn)品概述:
VGF是一種多聚陽離子聚合物,具有較高的陽離子電荷密度使得聚合物網(wǎng)絡(luò)在任何 pH下都能充當(dāng)有效的“質(zhì)子海綿”(proton sponge)體。這種聚陽離子能將各種報告基因轉(zhuǎn)入各種種屬細胞,其效果好于脂質(zhì)聚酰胺,經(jīng)進一步的改性后,其轉(zhuǎn)染性能好于樹枝狀聚合物,而且它的細胞毒性低。
三、使用方法:
大部分細胞系所使用的DNA(μg)與VGF(μg)的比值為1:3或 1:4,轉(zhuǎn)染狀態(tài)良好的細胞可獲得高轉(zhuǎn)染效率、高表達水平和低細胞毒性。下面以24孔板培養(yǎng)的哺乳動物細胞為例:
3.1 貼壁細胞:轉(zhuǎn)染前一天每孔0.5-2×10E5個細胞接種于 500 μL培養(yǎng)基中,在轉(zhuǎn)染時細胞可長至90-95%匯合度。
懸浮細胞:在配制轉(zhuǎn)染液前每孔4-8×10E5個細胞接種于500 μL培養(yǎng)基中。
3.2 轉(zhuǎn)染液制備,每孔細胞用量如下:
A. 用50 μL DMEM培養(yǎng)基 (或其他無血清培養(yǎng)基) 稀釋質(zhì)粒DNA,輕輕混勻。
B. 取適量VGF在50μL DMEM培養(yǎng)基中稀釋,室溫孵育5min。
C. 將前兩步所稀釋的DNA和VGF混合,輕輕混勻,室溫放置30min。
3.3 在每孔細胞中加入混合后的轉(zhuǎn)染液,輕輕搖勻。
3.4 貼壁細胞可在轉(zhuǎn)染4-6h后可更換培養(yǎng)基,懸浮細胞可在轉(zhuǎn)染后的18-48h之間,對細胞進行換液。轉(zhuǎn)染18-48h之后可檢測基因表達。如果檢測蛋白表達, 請在轉(zhuǎn)染后24-72h收集細胞樣品。
3.5 對于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,在轉(zhuǎn)染24h后以1:10傳代培養(yǎng),第二天可加入選擇培養(yǎng)基。
四、VGF與其他轉(zhuǎn)染試劑的效果:
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