四環(huán)素表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)
1992年Goseen等人成功的利用原核基因調(diào)控元件構(gòu)建了四環(huán)素（tetracycline,Tet）真核細(xì)胞基因調(diào)控表達(dá)系統(tǒng)。目前，此系統(tǒng)已被廣泛應(yīng)用于基因功能和基因治療領(lǐng)域的研究。
1.四環(huán)素調(diào)控表達(dá)系統(tǒng)的基本原理
Tet調(diào)控表達(dá)系統(tǒng)通過誘導(dǎo)藥物（如四環(huán)素和強(qiáng)力霉素等）改變調(diào)控蛋白的構(gòu)象，從而達(dá)到調(diào)控目標(biāo)蛋白表達(dá)的目的。
Tet調(diào)控基因表達(dá)系統(tǒng)是以大腸桿菌Tn10轉(zhuǎn)座子上Tet抗性操縱子為基礎(chǔ)而建立的。Tet阻遏蛋白（Tet repressor protein, TetR）與Tet操縱子（Tet operator, TetO）能夠特異性結(jié)合。當(dāng)無誘導(dǎo)藥物存在時，TetR會與TetO結(jié)合，從而阻斷下游耐藥基因的表達(dá)；當(dāng)有誘導(dǎo)藥物存在時，TetR的構(gòu)象會發(fā)生改變，并從TetO上脫離下來，使下游耐藥基因得以表達(dá)，細(xì)菌從而獲得耐藥性。
2. Tet-on調(diào)控系統(tǒng)
利用TetR和TetO特異性結(jié)合的特點(diǎn)，多種類型的Tet調(diào)控系統(tǒng)逐漸發(fā)展起來。其中，應(yīng)用較廣泛的為Tet-on激活型系統(tǒng)。
Tet-on系統(tǒng)由調(diào)節(jié)表達(dá)載體和反應(yīng)表達(dá)載體組成。調(diào)節(jié)表達(dá)載體包含一個人巨細(xì)胞病毒早期啟動子（PhCMV）和反義Tet轉(zhuǎn)錄活化因子（reverse tetracycline transcriptional activator，rtTA）。其中rtTA由反義TetR（reverse TetR, rTetR）和單純皰疹病毒（HSV）VP16 蛋白C端的一段轉(zhuǎn)錄激活區(qū)域融合而成。反應(yīng)表達(dá)載體由Tet應(yīng)答元件（Tet-responsive element, TRE）、CMV啟動子（minimal CMV promoter, PminCMV）及目的基因組成。其中TRE是7個重復(fù)的TetO序列。
Tet-on原理:
rtTA是由tTA突變4個氨基酸形成，它的表型與tTA相反。生理條件下，rtTA與TRE不結(jié)合，由于PminCMV缺少增強(qiáng)子，因此目的基因不表達(dá)；給于DOX后，DOX與rtTA的結(jié)合體與TRE結(jié)合，從而啟動基因表達(dá)。
Tet-off原理:
Tet轉(zhuǎn)錄活化因子(tetracycline transcriptional activator, tTA)是由TetR的1-207個氨基酸和單純皰疹病毒VP16激活結(jié)構(gòu)域的C端127個氨基酸組成。VP16的增加使得TetR由轉(zhuǎn)錄抑制因子變?yōu)檗D(zhuǎn)錄激活因子。生理條件下，tTA主動與TRE結(jié)合，啟動基因表達(dá)；若給于DOX后，DOX與tTA的結(jié)合體與TRE解離，從而抑制基因表達(dá)。
3. Tet-on調(diào)控系統(tǒng)的優(yōu)勢
Tet-on調(diào)控系統(tǒng)集高效率、精準(zhǔn)、安全、可逆性四大特點(diǎn)。
4. 維真Tet-on/off服務(wù)項目
Tet-on表達(dá)調(diào)控系統(tǒng)是當(dāng)前應(yīng)用更為廣泛的四環(huán)素調(diào)控系統(tǒng)，所以下面小V將以Tet-on為例對維真可做的服務(wù)項目進(jìn)行簡單介紹。
維真生物現(xiàn)有多種Tet-on表達(dá)調(diào)控載體，并能根據(jù)客戶需要包裝成teton的腺病毒、慢病毒和腺相關(guān)病毒。目前維真使用的是第三代技術(shù)（TRE3G）。第三代技術(shù)相比于前兩代技術(shù)來說，背景更低，藥物敏感度也更高。
