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慢病毒包裝服務
慢病毒（lentivirus）是逆轉錄病毒的一種，是RNA病毒，需要相對較長的孵育時間，所以稱之為“慢”病毒。慢病毒可以感染分裂細胞、感染非分裂細胞，在感染能力方面，可以有效地感染神經(jīng)元細胞、肝細胞、心肌細胞、腫瘤細胞、內(nèi)皮細胞、干細胞等多種類型細胞，此外由于其可以整合至細胞基因組，因此也常用于穩(wěn)定細胞株的篩選。
維真生物擁有十余年病毒包裝經(jīng)驗，依托于成熟穩(wěn)定的慢病毒包裝平臺和嚴格的生產(chǎn)質(zhì)控，可以提供從慢病毒質(zhì)粒設計、構建、病毒包裝、細胞系建立至基因表達分析在內(nèi)的所有服務外包項目。全套的慢病毒載體和表達系統(tǒng)可用于體內(nèi)外表達多物種cDNA、lncRNA、circRNA、shRNA和CRISPR/gRNA。
下面是具體服務內(nèi)容(具體規(guī)格、費用、貨期請詳詢客服)：
| 服務編號 | 服務類型 | 規(guī)格 | 目錄價 | 貨期 |
|---|---|---|---|---|
| WZ060001 | 小包裝、OE & CRISPR/Cas9 | 滴度≥1×10E8 TU/ml；體積1ml | 詢價 | 詳詢 |
| WZ060002 | 大包裝、OE & CRISPR/Cas9 | 滴度≥1×10E9 TU/ml；體積1ml | 詢價 |
詳詢 |
| WZ060003 | 小包裝、單shRNA | 滴度≥1×10E8 TU/ml；體積1ml | 詢價 | 詳詢 |
| WZ060004 | 大包裝、單shRNA | 滴度≥1×10E9 TU/ml；體積1ml | 詢價 | 詳詢 |
| WZ060005 | 小包裝、shRNA(3保1) | 滴度≥1×10E8 TU/ml；體積1ml | 詢價 | 詳詢 |
| WZ060006 | 大包裝、shRNA(3保1) | 滴度≥1×10E9 TU/ml；體積1ml | 詢價 | 詳詢 |
*如您對上述服務感興趣，請您點擊“歡迎垂詢”留下您的信息，我們將為您提供具體實驗方案和項目價格。
現(xiàn)貨產(chǎn)品： 對照慢病毒 工具慢病毒 慢病毒包裝載體 慢病毒表達載體 人源ORF慢病毒載體庫 人源/小鼠gRNA慢病毒文庫
相關服務： CAR-T服務 分子克隆 shRNA克隆 CRISPR 定點突變 KO/敲入/穩(wěn)定細胞系
技術資料： 慢病毒的制備 客戶文章 四種病毒的區(qū)別
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↓↓ 分以下幾個部分做詳細介紹 ↓↓ |
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慢病毒結構
慢病毒是一種有包膜的RNA病毒，直徑為80-120nm，呈二十面體對稱結構、球形。病毒顆粒最外層是包膜(包膜蛋白決定了感染細胞的類型)，再往里依次為基質(zhì)蛋白和衣殼，最里面是兩條相同的正股RNA鏈和酶(逆轉錄酶、整合酶和蛋白酶)。 下圖是慢病毒的結構示意圖： |
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慢病毒含有復雜的基因組。以HIV-1（人類免疫缺陷I型病毒）為例，HIV是一種單鏈RNA病毒，其基因組長度約為9.7kb?；蚪M兩端各有一個反向末端重復序列(inverted terminal repeat, ITR)，中間包括gag、 pol、env 3個結構基因及tat、rev、nef、vif、vpr、vpu 6 個調(diào)節(jié)基因。下圖是HIV-1基因組的示意圖：
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慢病毒感染細胞的過程
慢病毒感染細胞的第一步是通過包膜蛋白與細胞表面受體結合。慢病毒與宿主細胞膜融合后釋放結構蛋白、酶蛋白和病毒核心。病毒RNA在逆轉錄酶的作用下逆轉錄并與整合酶形成整合前復合物。整合前復合物進入細胞核后，整合酶催化其整合至宿主基因組。外源基因前啟動子驅動其在細胞質(zhì)中表達。 下圖是慢病毒感染細胞的示意圖： |
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1. 慢病毒有廣泛的宿主范圍，能夠有效地感染分裂細胞、非分裂細胞，特別適合于一些難轉染的細胞（如原代細胞、干細胞、不分化的細胞）和對腺病毒感染具有較強免疫反應的細胞（如樹突狀細胞、單核細胞和間充質(zhì)干細胞）等，能大大提高目的基因轉導效率，而且目的基因整合到宿主細胞基因組的幾率大大增加。
2. 慢病毒能將外源基因有效地整合入宿主染色體上，介導目的基因穩(wěn)定、長期的表達。因此，可以利用慢病毒建立穩(wěn)定細胞株。
3. 適用范圍更廣，不僅能用于體外實驗，還能用于活體動物模型，尤其是動物成瘤實驗。
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維真生物采用的包裝系統(tǒng)是2代包裝系統(tǒng)，即三質(zhì)粒系統(tǒng)，該系統(tǒng)包括1個包裝質(zhì)粒(psPAX2)、1 個包膜質(zhì)粒(pMD2G)、1個目的基因質(zhì)粒和1株包裝細胞(293T cell)。下圖是2代慢病毒包裝系統(tǒng)的示意圖：
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維真生物可以提供從LV質(zhì)粒構建至病毒包裝的所有服務外包項目。而且，維真生物全套的LV載體和表達系統(tǒng)可用于體內(nèi)和體外表達human/mouse/rat ORFs，lncRNA，circRNA，shRNAs和CRISPR/gRNA。下面是LV從頭合成的流程：
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維真生物采用蔗糖密度梯度超速離心法對LV病毒進行純化。它利用不同顆粒之間存在的沉降系數(shù)差，在一定離心力作用下，顆粒各自以一定速度沉降，在密度梯度不同區(qū)域上形成區(qū)帶。下圖是LV病毒純化的示意圖：
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維真生物的LV病毒采用孔稀釋法進行標定。
孔稀釋法是通過數(shù)熒光的方法測定慢病毒滴度，得到的結果為有感染能力的慢病毒顆粒數(shù)。下圖是維真某慢病毒(3.20×108TU/mL)孔稀釋法測滴度時的熒光圖：
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1. 載體全： |
多種表達載體、多種標簽載體和多種報告基因可供客戶選擇。 |
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2. 貨期短： |
Human ORF cDNA克隆和Human microRNA克隆可在2-3天穿梭至慢病毒載體，個性化定做慢病毒； |
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3. 服務優(yōu)： |
可根據(jù)客戶具體實驗，由公司專業(yè)技術人員提供載體構建方案，提供特殊定制服務。 |
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4. 贈送： |
贈送慢病毒助感染試劑，這對于難感染細胞有很大的幫助，下圖是助感染試劑在HepG2和CNE2細胞中的效果圖。 |
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1、什么情況下選用慢病毒？
慢病毒的宿主范圍比較廣，既能感染分裂細胞，也能感染非分裂的細胞，在體內(nèi)外研究中均可選擇慢病毒作為病毒載體。此外，慢病毒也是構建穩(wěn)轉株的理想病毒。
2、慢病毒載體可插入多大的 ORF 片段？
一般情況下，慢病毒載體可容納6 kb插入片段。然而，插入的ORF基因大于3 kb時會大大降低病毒的包裝效率，進而影響病毒滴度甚至基因表達。
3、用于慢病毒感染的細胞接種量是多少？
將狀態(tài)良好的目的細胞接種到24孔板，細胞濃度一般為1×105/mL細胞，接種細胞數(shù)量需要考慮到細胞活力因素、狀態(tài)因素、生長快慢因素、分裂因素等，一般是保證病毒感染時細胞匯合率達到50%-70%為佳。
4、什么是 MOI ？
MOI （multiplicity of infection），即感染復數(shù)，指的是感染時病毒與細胞數(shù)量的比值。一般認為MOI是一個比值，沒有單位。
5、慢病毒是否能夠穩(wěn)定表達基因？
是的。慢病毒能將外源基因整合到宿主基因組中，不會隨著細胞分裂傳代而丟失，因此能實現(xiàn)外源基因的長期穩(wěn)定表達。
6、維真慢病毒的包裝周期是多久？
如果客戶提供構建好的慢病毒載體，那么包裝時間一般為2周左右，若包含前期載體構建等的時間，時間大概在5周左右。
7、慢病毒感染細胞后，目的基因的表達什么時間達到峰值？
慢病毒感染目的細胞后，一般情況下，在72-96h目的基因的表達能達到峰值，但是對于一些特殊細胞、如增殖傳代比較慢的細胞，蛋白表達達到峰值則需要更長的時間。
8、怎樣提高慢病毒的感染效率？
細胞良好的生長狀態(tài)和感染時適合的 MOI 值是達到高感染效率的保證。一般可以通過提高感染時的 MOI 值來提高病毒的感染效率，必要時可在感染時加入助感染試劑ADV-HR來提高慢病毒的感染效率。
9、慢病毒感染后，細胞狀態(tài)很差，甚至出現(xiàn)死亡，為什么？
慢病毒會對細胞造成一定的毒性，不同細胞對毒性的耐受力不同。建議調(diào)整并降低感染時使用的MOI值，即可在細胞準備時增加鋪板細胞的匯合率（可提高至 70%），調(diào)整感染時加入的病毒量。此外，還可選擇在感染4小時后換液，用新鮮的完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)觀察。
10、慢病毒、腺病毒、腺相關病毒三種病毒有什么區(qū)別？如何選擇？
對于轉染困難的細胞，科研工作者通常會選擇病毒來導入目的基因。目前，腺病毒、慢病毒和腺相關病毒是常用的病毒載體工具。那么如何選擇適合您實驗體系的病毒工具，請參考下面3種病毒工具的比較：
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病毒表達系統(tǒng) |
腺病毒 |
腺相關病毒 |
慢病毒 |
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病毒基因組 |
dsDNA |
ssDNA |
ssRNA |
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病毒外殼 |
無 |
無 |
具有包膜蛋白 |
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基因組大小 |
38-39kb |
5kb |
9kb |
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包裝容量 |
7.5kb |
4.7kb |
6kb |
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感染的細胞類型 |
分裂細胞和非分裂細胞 |
分裂細胞和非分裂細胞 |
分裂細胞和非分裂細胞 |
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整合至宿主基因組 |
非整合 |
非整合 |
整合 |
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表達豐度 |
高水平表達 |
高水平表達 |
中到高水平表達 |
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表達時間 |
快（1-2天） |
1-2周（體內(nèi)） |
慢（2-4天） |
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外源基因持續(xù)表達時間 |
短暫 |
潛在的持久 |
長久 |
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免疫反應 |
較高 |
極低 |
低 |
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相對病毒滴度 |
10E10pfu/mL |
10E13VG/mL |
10E8TU/mL |
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生物安全等級 |
BSL-2 |
BSL-2 |
BSL-2 |
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