基因過表達(dá)效果檢測(cè)
服務(wù)介紹
研究基因的表達(dá)與功能時(shí)，科研工作者首先需要將外源DNA導(dǎo)入細(xì)胞/組織中。DNA的體內(nèi)外遞送需要用到運(yùn)輸工具-載體，而質(zhì)粒和病毒是兩種常用的基因遞送載體。通過將目的基因克隆至相應(yīng)的表達(dá)載體，利用細(xì)胞轉(zhuǎn)染或者病毒感染的方式實(shí)現(xiàn)外源基因的過表達(dá)。外源基因的過表達(dá)效果如何是科研工作者非常關(guān)心的問題。維真生物可以采用常規(guī)分子生物學(xué)技術(shù)揭示結(jié)果。
服務(wù)內(nèi)容
維真生物可為客戶提供基因轉(zhuǎn)錄水平和翻譯水平的基因表達(dá)檢測(cè)服務(wù)，具體信息詳見下表；
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服務(wù)編號(hào)
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服務(wù)類型
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規(guī)格
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目錄價(jià)
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貨期
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WZ080001
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mRNA檢測(cè)
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實(shí)時(shí)定量PCR
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詢價(jià)
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咨詢
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WZ080002
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蛋白質(zhì)檢測(cè)
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Western blot
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詢價(jià)
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咨詢
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*如您對(duì)上述服務(wù)感興趣，請(qǐng)您點(diǎn)擊“歡迎垂詢”留下您的信息，我們將盡快聯(lián)系您。
相關(guān)服務(wù)： 分子克隆 腺病毒包裝 慢病毒包裝 腺相關(guān)病毒包裝 穩(wěn)定細(xì)胞株建立
實(shí)時(shí)定量PCR & Western blot
實(shí)時(shí)定量PCR是定量分析mRNA最通用、最快速和最簡(jiǎn)便的方法。該方法利用熒光信號(hào)累積實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，最后通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行定量分析，具有很高的靈敏性和特異性。目前，實(shí)時(shí)定量PCR常用的為熒光染料嵌合法(SYBR Green)和熒光探針法。其中，熒光染料嵌合法(SYBR Green)是最經(jīng)濟(jì)、最簡(jiǎn)便的，它利用熒光染料(SYBR Green)與雙鏈DNA分子結(jié)合發(fā)光的特性，指示PCR擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，從而揭示基因轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá)特征。
Western blot，也稱免疫印跡，是利用抗原與抗體特異性結(jié)合的原理檢測(cè)外源基因表達(dá)的特異蛋白質(zhì)。經(jīng)過PAGE膠分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相支持物（如硝酸纖維素膜、PVDF膜）上，固相支持物以非共價(jià)鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相支持物上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對(duì)應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的二抗起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測(cè)電泳分離的特異目的基因表達(dá)的蛋白質(zhì)。該技術(shù)被廣泛應(yīng)用于定性和半定量分析蛋白表達(dá)水平，從而揭示基因翻譯水平的表達(dá)特征。
服務(wù)流程
相關(guān)資料
基因過表達(dá)不成功怎么辦？
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Step 1
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通過查看測(cè)序結(jié)果檢查重組質(zhì)粒構(gòu)建是否正確。
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Step 2
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實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證基因是否成功轉(zhuǎn)錄。
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Step 3
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Western Blot檢測(cè)蛋白是否成功過表達(dá)。
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通過以上3步排查法，鎖定問題所在，針對(duì)性地解決問題。
通常，標(biāo)簽的使用、制備質(zhì)粒的質(zhì)量、抗體的有效性、蛋白的壽命、特殊類型的蛋白和基因序列的復(fù)雜性均會(huì)影響好的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。另外，實(shí)驗(yàn)時(shí)對(duì)照組的設(shè)置也是非常關(guān)鍵的，合理的對(duì)照可以幫助科研工作者得到完美的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，一旦出現(xiàn)問題，也便于科研工作者快速找到問題所在。
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