穩(wěn)定細(xì)胞系建立
服務(wù)介紹
高質(zhì)量的穩(wěn)定細(xì)胞系在生物學(xué)研究中扮演著非常重要的角色，包括基因功能研究、重組抗體、藥物開發(fā)等。穩(wěn)轉(zhuǎn)株即穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株，指的是基于某一細(xì)胞系構(gòu)建的持續(xù)過(guò)表達(dá)或干擾某特定基因的細(xì)胞系。慢病毒感染-藥物篩選法是目前廣泛應(yīng)用的穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建方法，具有高效整合、目標(biāo)細(xì)胞廣泛等特點(diǎn)。維真生物可為科研工作者提供OE質(zhì)粒構(gòu)建、OE慢病毒包裝、過(guò)表達(dá)效果驗(yàn)證以及OE細(xì)胞系建立等服務(wù)。*OE=overexpression
服務(wù)內(nèi)容
維真生物具有多年穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選經(jīng)驗(yàn)，可為客戶篩選高質(zhì)量的穩(wěn)定細(xì)胞株，客戶可從維真生物細(xì)胞庫(kù)中選擇相應(yīng)的細(xì)胞株，也可提供自有細(xì)胞株。具體服務(wù)內(nèi)容見下面：
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服務(wù)編號(hào)
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服務(wù)類型
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規(guī)格
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目錄價(jià)
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貨期
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WZ130001-1
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單基因OE細(xì)胞系建立
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混合克隆
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詢價(jià)
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咨詢
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WZ130001-2
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單克隆
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詢價(jià)
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咨詢
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WZ130002-1
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多基因OE細(xì)胞系建立
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混合克隆
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詢價(jià)
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咨詢
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WZ130002-2
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單克隆(雙基因)
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詢價(jià)
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咨詢
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*客戶提供自有細(xì)胞，需要額外支付細(xì)胞測(cè)試費(fèi)用！
*如您對(duì)上述服務(wù)感興趣，請(qǐng)您點(diǎn)擊“歡迎垂詢”留下您的信息，我們將盡快聯(lián)系您。
相關(guān)服務(wù)： 分子克隆 基因過(guò)表達(dá)效果的檢測(cè) 慢病毒包裝
穩(wěn)定細(xì)胞系建立的原理
將外源DNA/shRNA克隆到帶有某種抗性基因的載體上，重組載體被轉(zhuǎn)染至宿主細(xì)胞并整合到其染色體中，并能隨細(xì)胞分裂穩(wěn)定傳遞下去，用載體中所含抗性基因進(jìn)行篩選。常用的真核表達(dá)載體抗性篩選標(biāo)志物有新霉素(neomycin)、殺稻瘟菌素（blasticidin)和嘌呤霉素(puromycin)。
服務(wù)優(yōu)勢(shì)
1. 種子細(xì)胞優(yōu)良：維真生物所有的細(xì)胞均從ATCC 細(xì)胞庫(kù)購(gòu)買，代數(shù)低且無(wú)污染；
2. 生產(chǎn)工藝穩(wěn)定：嚴(yán)格的篩選及靶基因表達(dá)驗(yàn)證體系；
3. 細(xì)胞活力無(wú)損：嚴(yán)格的建系后連續(xù) 5 代細(xì)胞增殖活力評(píng)價(jià)；
4. 產(chǎn)品質(zhì)量保證：采用 RT-qPCR 驗(yàn)證，保證表達(dá)水平。
服務(wù)流程
應(yīng)用實(shí)例
相關(guān)資料
FAQs
1. 在什么情況下，我需要建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系？
穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系是相對(duì)瞬時(shí)轉(zhuǎn)染而言的。瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的表達(dá)時(shí)間短暫，外源基因?qū)胝匣蚪M的幾率非常低，絕大部分以游離形式存在，不能隨細(xì)胞分裂而一同復(fù)制，導(dǎo)致最后拷貝數(shù)被稀釋，無(wú)法達(dá)到持續(xù)表達(dá)外源基因的目的。通常，在下面幾種情況下需要建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系：
①長(zhǎng)期在目的細(xì)胞中研究基因功能，通過(guò)建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系，可以降低頻繁轉(zhuǎn)染或者病毒包裝的成本，方便實(shí)驗(yàn)研究；
②部分蛋白半衰期極長(zhǎng)，瞬時(shí)RNA只能干擾表達(dá)，無(wú)法去除已經(jīng)表達(dá)的目的蛋白，通過(guò)構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系可以實(shí)現(xiàn)更好的基因干擾效果；
③瞬轉(zhuǎn)會(huì)引入極高拷貝數(shù)的表達(dá)，導(dǎo)致因?yàn)槿藶橐蛩卦斐蓪?shí)驗(yàn)結(jié)果的不精確，建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系可以幫助篩選拷貝數(shù)適量的細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究；
④需要用誘導(dǎo)表達(dá)系統(tǒng)的，主要是一些致死基因或者是需要時(shí)空表達(dá)的；
⑤需要用細(xì)胞做動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的，比如裸鼠成瘤等，往往需要建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系。
2. 建立穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞系時(shí)用質(zhì)粒好還是慢病毒好？
理論上用質(zhì)?？梢越⒎€(wěn)定細(xì)胞株的，但是質(zhì)粒整合入基因組的效率極低，很難成功。慢病毒可以攜帶外源基因隨機(jī)整合進(jìn)基因組，效率很高，是建立穩(wěn)定細(xì)胞株的理想方式。通過(guò)慢病毒篩選穩(wěn)定細(xì)胞株是目前主流的方法。
3. 影響穩(wěn)定細(xì)胞株建立的因素有哪些？
①外源基因整合的幾率：決定了穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選的難易程度；
②插入外源基因片段的拷貝數(shù)：通常，低拷貝或者單拷貝可以降低人為因素的干擾；
③整合位點(diǎn)轉(zhuǎn)錄活躍度：決定了穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選細(xì)胞后穩(wěn)轉(zhuǎn)株中外源基因片段的表達(dá)質(zhì)量；
④外源基因片段整合到細(xì)胞后的穩(wěn)定性：不同的整合位點(diǎn)決定了外源片段在染色體中的穩(wěn)定性，有些區(qū)域易發(fā)生重組或者丟失，從而使穩(wěn)轉(zhuǎn)株篩選后出現(xiàn)丟失的現(xiàn)象。
