殺傷靶細胞

CAR-T細胞對腫瘤細胞的殺傷能力測定是CAR-T免疫細胞治療中的重要一環(huán)，通過CAR-T細胞殺傷攜帶抗原表位的細胞系從而反映其殺傷效率，是評價CAR-T細胞殺傷能力的重要方法。因此，我們選取了目前較為熱門的幾個臨床靶點，成功開發(fā)了方便血液瘤及神經(jīng)膠質(zhì)母細胞瘤研究的多株單克隆細胞：K562-CD19-GFP、K562-BCMA-GFP 和 K562-EGFRvIII-GFP，為客戶進行CAR-T細胞的體外功能性驗證帶來了極大的便利。

CAR-T靶點介紹

①CD19是正常和惡性B淋巴細胞特異性表面蛋白，在B細胞的發(fā)育，增殖和分化以及惡性轉(zhuǎn)化中發(fā)揮重要作用，因其在B淋巴細胞表達的特異性和B淋巴系統(tǒng)惡性腫瘤表達的廣泛性，使CD19成為CAR-T治療B細胞腫瘤的理想靶點。目前，F(xiàn)DA已經(jīng)批準(zhǔn)上市的CAR-T藥物治療靶點都是CD19，且均針對血液瘤，分別是諾華的KYMRIAH和吉利德的YESCARTA。

②BCMA（B細胞成熟抗原/CD269）是TNFR超家族的一種跨膜蛋白，幾乎只在成漿細胞和分化的漿細胞表面表達，由于CD19很少在多發(fā)性骨髓瘤的惡性漿細胞中表達，因此BCMA被認為是多發(fā)性骨髓瘤（MM）的關(guān)鍵診斷標(biāo)志物和治療靶點。

③EGFRvIII（表皮生長因子受體變體III/ΔEGFR），近年來發(fā)現(xiàn)的一類僅表達于腫瘤細胞表面的，表皮生長因子受體（EGFR）最常見的突變體，是一種腫瘤特異性抗原。神經(jīng)膠質(zhì)母細胞瘤（GBM）是原發(fā)性腦腫瘤中最常見且死亡率最高的惡性腫瘤，國內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)：40%-60%的GBM顯著表達EGFR，且其突變體形式以EGFRvIII為主，因此EGFRvIII是CAR-T療法治療神經(jīng)膠質(zhì)母細胞瘤的理想靶點。

產(chǎn)品介紹

1.K562-CD19-GFP單克隆細胞系（產(chǎn)品貨號：CL852678）

產(chǎn)品優(yōu)勢：

①穩(wěn)定表達CD19抗原和copGFP，可作為殺傷實驗中有效的靶細胞；
②帶有GFP熒光，減少后期殺傷效果檢測中抗體的使用，節(jié)約成本；

數(shù)據(jù)支持：

1.1 單克隆細胞鑒定實驗

K562細胞與K562-CD19-GFP單克隆細胞中CD19與GFP表達量的鑒定

用流式細胞術(shù)分別對K562細胞和K562-CD19-GFP單克隆細胞中CD19和copGFP的表達量進行檢測，檢測結(jié)果表明，K562-CD19-GFP單克隆細胞中CD19表達量為100%，GFP表達量為99.4%。經(jīng)鑒定，穩(wěn)定表達CD19和GFP的單克隆細胞株K562-CD19-GFP構(gòu)建成功。

1.2 T細胞殺傷實驗

實驗方法： 按照靶細胞每孔1*10^4個，效應(yīng)細胞每孔1*10^5個（效靶比為10：1）分別加至96孔板中，再加入CD3-CD19雙特異性抗體進行殺傷實驗。

實驗共設(shè)置5個梯度，分組如下：

GFP陽性細胞存活率檢測

殺傷24 h后進行流式鑒定，觀察GFP陽性細胞的存活率。結(jié)果表明，T細胞對K562-CD19-GFP單克隆細胞有很好的殺傷效果，（效應(yīng)細胞對靶細胞）殺傷率可高達94%，且在一定濃度范圍內(nèi)，GFP陽性細胞的數(shù)量與抗體濃度呈負相關(guān)。

2.產(chǎn)品名稱：K562-BCMA-GFP單克隆細胞系（產(chǎn)品貨號：CL873263）

產(chǎn)品優(yōu)勢：

①穩(wěn)定表達BCMA抗原和copGFP，可作為殺傷實驗中有效的靶細胞；
②帶有GFP熒光，減少后期殺傷效果檢測中抗體的使用，節(jié)約成本；

結(jié)果分析：

用流式細胞術(shù)分別對K562和K562-BCMA-GFP單克隆細胞中BCMA和copGFP的表達量進行檢測，結(jié)果表明，BCMA表達量為99.8%，GFP表達量為100%。另外，通過使用高分辨率的明場和熒光成像對細胞進行成像和分析，進一步證實了能夠穩(wěn)定表達BCMA和GFP的單克隆細胞株K562-BCMA-GFP構(gòu)建成功。

3.產(chǎn)品名稱：K562-EGFRvIII-GFP單克隆細胞系（產(chǎn)品貨號：CL001346941）

產(chǎn)品優(yōu)勢：

①穩(wěn)定表達EGFRvIII抗原和copGFP，可作為殺傷實驗中有效的靶細胞；
②帶有GFP熒光，減少后期殺傷效果檢測中抗體的使用，節(jié)約成本；

結(jié)果分析：

用流式細胞術(shù)分別對K562和K562-EGFRvIII-GFP單克隆細胞中EGFRvIII和copGFP的表達量進行檢測，結(jié)果表明，EGFRvIII表達量為99.1%，GFP表達量為99.7%。另外，通過使用高分辨率的明場和熒光成像對細胞進行成像和分析，進一步證實了能夠穩(wěn)定表達EGFRvIII和GFP的單克隆細胞株K562-EGFRvIII-GFP構(gòu)建成功。

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